10.5. A gyakorlat menete

Növényi genomi DNS izolálás

  1. Anyagok: ~ 20 mg friss vagy fagyasztott növényi szövet. Vágjuk a szöveteket kis darabokra. Ezután dörzsmozsárban, folyékony nitrogénben porszerűvé dörzsöljük, majd egy steril Eppendorf csőbe tesszük. Hozzáadunk 200 µl AquaGenomic oldatot.

  2. Homogenizáljuk az oldatot vortex segítségével. Majd adjunk hozzá 1/10 térfogat arányban (~30 µl) izopropanolt a habzás csökkentéséhez. Ezután a lizátumot 65 ºC-on 15 percig inkubáljuk.

  3. Óvatosan vortexeljük, majd a lizátumot centrifugáljuk 14.000 g-n, 5 percig.

  4. A felülúszót egy új centrifugacsőbe helyezzük. Adjunk hozzá 1 térfogatnyi (~180 µl) 100% izopropanolt és vortexeljük 1 percig. Centrifugáljuk az oldatot 14.000 g-én, 5 percig a DNS csapadék összegyűjtésére. Elöntjük a felülúszót, majd a DNS csapadékot 70% alkohollal mossuk. A mosást kétszer ismételjük. Az alkohol teljes eltávolítása után a DNS-t levegőn, 37 ºC-on szárítjuk. Adjunk 40 µl TE puffert vagy desztillált vizet a DNS oldatba viteléhez.